合成基因的方式
01
全基因合成
分子较小而又不易得到的基因采用该方式。将双链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基因在100个核苷酸以上时),每个片段长度控制在40~60个碱基,并使每对相邻互补的片段之间有4~6个碱基交叉重叠。在体外将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火后加入dna连接酶,即可得到较大的基因片段。
02
酶促合成
又称基因的半合成。全基因,特别是较大的基因的全部化学合成成本昂贵,使用半合成的方法可以降低成本,从而利于普及使用。
首先合成末端之间有10~14个互补碱基的寡核苷酸片段,退火后以重叠区作为引物,在4种dntp存在的条件下,通过dna聚合酶i大片段(klenow酶)或反转录酶的作用,获得两条完整的互补双链。
03
合成探针
人工合成的具有特定顺序的寡聚dna片段,已应用于筛选和鉴定重组质粒或λ噬菌体。实验证明用合成的寡核苷酸片段,即使只有1对碱基错配采用严谨条件杂交也能与完全互补的双链相区别。
04
合成引物
合成pcr引物进行基因扩增:pcr技术是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异dna片段的技术。该法操作简便,可在短时间内在试管中获得数百万特异dna序列拷贝。pcr技术的特异性取决于所用引物和模板dna结合的特异性。
序列测定用引物:dna序列测定是分子生物学中最重要和最精细的研究技术,其中最常使用的是末端终止法,即是一种依赖于特异dna引物的序列测定方法。
05
合成导入突变用的引物
利用寡核苷酸引导的突变,可在目的dna序列的任何部分产生点突变、插入和缺失,从而使得基因编码的蛋白质在结构和功能上发生改变。
06
合成连接子和接头
在dna重组中常需要将外源dna片段插入某些载体dna中。如果载体或外源dna上没有合适的限制性内切酶位点,为提高插入效率或实现定向克隆,可采用合成连接子(linker)和接头(adaptor)的方法。返回搜狐,查看更多
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