合成基因的方式

01

全基因合成

分子较小而又不易得到的基因采用该方式。将双链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基因在100个核苷酸以上时)，每个片段长度控制在40～60个碱基，并使每对相邻互补的片段之间有4～6个碱基交叉重叠。在体外将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火后加入dna连接酶，即可得到较大的基因片段。

02

酶促合成

又称基因的半合成。全基因，特别是较大的基因的全部化学合成成本昂贵，使用半合成的方法可以降低成本，从而利于普及使用。

首先合成末端之间有10～14个互补碱基的寡核苷酸片段，退火后以重叠区作为引物，在4种dntp存在的条件下，通过dna聚合酶i大片段(klenow酶)或反转录酶的作用，获得两条完整的互补双链。

03

合成探针

人工合成的具有特定顺序的寡聚dna片段，已应用于筛选和鉴定重组质粒或λ噬菌体。实验证明用合成的寡核苷酸片段，即使只有1对碱基错配采用严谨条件杂交也能与完全互补的双链相区别。

04

合成引物

合成pcr引物进行基因扩增：pcr技术是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异dna片段的技术。该法操作简便，可在短时间内在试管中获得数百万特异dna序列拷贝。pcr技术的特异性取决于所用引物和模板dna结合的特异性。

序列测定用引物：dna序列测定是分子生物学中最重要和最精细的研究技术，其中最常使用的是末端终止法，即是一种依赖于特异dna引物的序列测定方法。

05

合成导入突变用的引物

利用寡核苷酸引导的突变，可在目的dna序列的任何部分产生点突变、插入和缺失，从而使得基因编码的蛋白质在结构和功能上发生改变。

06

合成连接子和接头

在dna重组中常需要将外源dna片段插入某些载体dna中。如果载体或外源dna上没有合适的限制性内切酶位点，为提高插入效率或实现定向克隆，可采用合成连接子(linker)和接头(adaptor)的方法。返回搜狐，查看更多

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